外觀：	白色無定形粉末或無色透明液體
蛋白比活：	≥20,000 KU/mg protein
純度：	不含RNase、蛋白酶、其它DNA內(nèi)切酶和外切酶；≥95%(SDS-PAGE)
穩(wěn) 定性：	-20℃至少穩(wěn)定2年
分子量：	~35kD的糖蛋白
等電點：	6.0左右
抑制劑：	EDTA 、EGTA、SDS、DTT、β-巰基乙醇等還原劑
激活劑：	Mg²⁺，Mn²⁺，Ca²⁺，Co²⁺
pH穩(wěn)定性：	4.0-9.0（25℃，24h）
最適 pH：	6.0
最適溫度：	活力隨溫度（20℃-60℃）升高逐漸升高；37℃測值為25℃測值的3.3倍。
熱穩(wěn)定性：	55℃以下穩(wěn)定；60℃加熱30min后活力依然保留50%以上；70℃以上失活。。

二、酶活測定方法

1. 原理

利用DNase降解DNA生成寡核苷酸時260nm處的吸光值會升高的原理，在一定條件下，OD260每分鐘的增加率與DNase的含量成正比例。以牛胸腺DNA為底物，在pH5.0、25℃條件下，1Kunitz unit能使OD₂₆₀每分鐘增加0.001。

2. 測活試劑

2.1 1M 醋酸鈉緩沖液 (pH 5.0)：將13.6g醋酸鈉溶于80ml去離子水，再用6M HCl調(diào)pH 5.0（25℃），加去離子水定容至100ml，室溫保存。

2.2 100mM MgSO₄：將1.2g MgSO₄溶于100ml去離子水，室溫保存。

2.3 0.033% (W/V)小牛胸腺DNA

1）將100mg 小牛胸腺DNA（欣經(jīng)科貨號：7026）溶于300ml預(yù)冷的去離子水中，冰浴至少30min，緩慢攪拌至完全溶解。分裝后，凍存于-20℃。臨用前在37℃解凍。

2）測定DNA的濃度

a. 用去離子水將1.1.3底物DNA樣品稀釋N倍（10-30倍），以去離子水作為陰性對照。

b. 用UV分光光度儀測定OD₂₆₀，以陰性對照歸零。

c. 1個OD₂₆₀單位相當(dāng)于50μg/ml DNA，DNA濃度的計算公式如（1.1）。

（1.1）

2.4 酶稀釋液：即0.85% NaCl（150mM）。將0.85g NaCl溶于100ml去離子水，室溫保存。

2.5 反應(yīng)液R

1）按下表配置50ml 反應(yīng)液R。

2）輕柔混勻后，用0.1M HCl和0.1M NaOH調(diào)pH 5.0 (25oC)。2-8℃可穩(wěn)定保存至少2個月。

3）*注意：根據(jù)4.3測得的DNA濃度適當(dāng)添加去離子水和底物DNA。測活試劑R中DNA的終濃度為0.004%(w/v) ，即40ug/ml，OD₂₆₀吸光值為0.8。

試劑	ml
1M 醋酸鈉(pH 5.0)	5.0
100mM MgSO4	2.5
0.033% (W/V)小牛胸腺DNA	6.0* (2.0mg of DNA)
去離子水	36.5*

1. 待測樣品的配制

測活前，用酶稀釋液溶解重組型bpDNase I干粉后，再用酶稀釋液將酶液稀釋至200-500 Kuniz units/ml，按以下步驟檢測酶活。

2. 酶活檢測步驟

在1cm的石英比色杯中加入2.5ml 2.2.2測活試劑R，25℃條件下保溫1.5min后，加0.5ml待測樣品，迅速混勻，在260nm波長下讀取2min內(nèi)最大的吸光度變化率（ΔA₂₆₀nm/min _Sample）。同時以0.5ml去離子為空白對照，記錄ΔA₂₆₀nm/min _Blank。按照以下公式計算酶活力。線性范圍是400-500U/ml。3.00ml反應(yīng)體系含83mM 醋酸鈉緩沖液(pH5.0)，4.2mM MgSO4，25mM NaCl，33.33ug/ml小牛胸腺DNA及200-250 Kuniz units DNase I。酶活力計算公式：

Activity（Kunitz Units/ml）= (ΔA₂₆₀nm/min _Sample -ΔA₂₆₀nm/min _Blank) X (3) X D =△A/min×6000×D

0.001×0.5×1

Vt	反應(yīng)液總體積（3ml）
ε	0.001 = ΔA 260nm per the unit definition
Vs	樣品體積 (0.5ml)
d	比色皿光程 (1cm)
D	稀釋倍數(shù)
△A/min	△A/min_Sample －△A/min_Blank（單位：Abs/min）

三、酶性質(zhì)

未找到相應(yīng)參數(shù)組，請于后臺屬性模板中添加

暫未實現(xiàn),敬請期待

關(guān)鍵詞

雞心乳酸脫氫酶（L-LDH）

IVD原料