外觀：	白色無定形粉末。
凍干緩沖液：	50mM PB-K，1mg/ml BSA，pH7.0
比活力：	≥70U/mg干粉（乳酸底物法）；≥100U/mg干粉（丙酮酸底物法）。
穩(wěn) 定性：	干粉于-20℃至少穩(wěn)定一年。
分子量：	~38kD (SDS-PAGE)
等電點：	7.89
pH穩(wěn)定性：	4.0～10.0穩(wěn)定 (500-1000U/L，25℃，24hr) （Figure 1）
最適pH ：	10.0-11.0 (乳酸底物法， Figure 4)；7.0~8.0 (丙酮酸底物法， Figure 5)
最適溫度：	60℃ （Figure 2 and 6）
熱穩(wěn)定性：	1kU/L時60℃加熱30min不失活（乳酸底物法）。（Figure 3）
穩(wěn) 定劑：	添加≥1mg/ml BSA有助于稀釋樣品的穩(wěn)定。
復(fù) 溶：	用去離子水或50mM PB-K (pH 7.0) 復(fù)溶。

二、乳酸底物法測定酶活

2.1 測定原理

在強堿性條件下，雞心L-LDH催化L-乳酸與NAD⁺反應(yīng)生成丙酮酸和NADH。在一定范圍內(nèi)NADH的生成速率與L-LDH活力成正比。在340nm處測定NADH的生成速率，根據(jù)酶活計算公式即可測出酶活力。1個酶活單位（U）等于在下述反應(yīng)條件下每分鐘生成1微摩爾NADH所需的酶量。

2.2 檢測方法

1. 酶稀釋液：50mM PB-K，1mg/ml BSA，0.1% NaN3，pH7.0。過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期1年。

2. Buffer：350mM CAPS（Mr=221.32），0.1% NaN3，pH10.0 (25℃)，過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期一個月。

3. R1：1M 乳酸鋰，0.1% NaN3。過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期一個月。

4. R2：9mM NAD，0.1% NaN3。過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期為一周。

1. R：臨用前按Buffer : R1 : R2=920ul : 80ul : 200ul比例混合，2-8℃保存，保質(zhì)期1天。用前恢復(fù)室溫。

2. 待測酶液S：稱量所需的酶粉，用去離子水或50mM PB-K (pH 7.0)復(fù)溶，定容到既定體積配制成待測酶液S。用酶稀釋液將其稀釋至200-2000U/L內(nèi)的2-5個梯度。

3. 酶活檢測步驟

1）將1200ul的R添加至“d=1.0cm”的石英比色皿中，37℃溫育1min；然后加入20ul待測酶液 S，充分混勻后，37℃反應(yīng)至3min；記錄第2-3min內(nèi)OD₃₄₀的變化，并計算每分鐘吸光值變化率（△As/min）。測活歷程如下：

2）重復(fù)以上步驟，用20μl酶稀釋液作為陰性對照。記錄空白吸光值（△Ab/min）。

1. 計算公式

Vt	：反應(yīng)液總體積（ml）
ε	：NADH摩爾吸光系數(shù)6.22（cm²/micromole）
Vs	：樣品體積（ml）
d	：比色杯光程（1cm）
D	：稀釋倍數(shù)
△A/min	：△As/min-△Ab/min
方向	：升反應(yīng)
線性	：0-2000U/L，建議稀釋至200-2000U/L。

2.3 酶性質(zhì)附圖（乳酸底物法）

三、丙酮酸底物法測定酶活

3.1 測定原理

在中性偏堿條件下，雞心L-LDH催化丙酮酸和NADH反應(yīng)生成L-乳酸與NAD⁺。在一定范圍內(nèi)NADH的消耗速率與L-LDH活力成正比。在340nm處測定NADH的消耗速率，根據(jù)酶活計算公式即可測出酶活力。1個酶活單位（U）等于在下述反應(yīng)條件下每分鐘消耗1微摩爾 NADH所需的酶量。

3.1 檢測方法

1. Buffer：100mM PB-K，pH7.0。

2. 酶稀釋液：50mM PB-K，1mg/ml BSA，0.1%NaN3，pH7.0。過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期1年。

3. R1：100mM PB-K，25.4mM丙酮酸鈉鹽或鉀鹽，0.1%NaN3，pH7.0。過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期一個月。

4. R2：10mM Tris-HCl， 10mg/ml NADH，0.1%NaN3，pH9.7，過0.22um濾膜后2-8℃保存，保質(zhì)期1周。

5. R：臨用前按Buffer : R1 : R2=3000ul : 100ul : 50ul比例混合，2-8℃保存，保質(zhì)期1天。用前恢復(fù)室溫當(dāng)OD₃₄₀<0.8時，重新配置R。若OD₃₄₀依然小于0.8，請重新配置R2。

6. 待測酶液S：稱量所需的酶粉，用去離子水或50mM PB-K (pH 7.0)復(fù)溶，定容到既定體積配制成待測酶液S。用酶稀釋液將其稀釋至500-3000U/L范圍內(nèi)的2-5個梯度。

7. 酶活檢測步驟

1）將1200ul的R添加至“d=1.0cm”的石英比色皿中，37℃溫育1min；然后加入20ul待測酶液 S，充分混勻后，37℃反應(yīng)至3min；記錄第2-3min內(nèi)OD₃₄₀的變化，并計算每分鐘吸光值變化率（△As/min）。測活歷程如下：

2）重復(fù)以上步驟，用20μl酶稀釋液作為陰性對照。記錄空白吸光值（△Ab/min）。

8. 計算公式

Vt	：反應(yīng)液總體積（ml）
ε	：NADH摩爾吸光系數(shù)6.22（cm²/micromole）
Vs	：樣品體積（ml）
d	：比色杯光程（1cm）
D	：稀釋倍數(shù)
△A/min	：△As/min-△Ab/min
方向	：降反應(yīng)
線性	：0-3000U/L，建議稀釋至500-3000U/L。

3.3 酶性質(zhì)附圖（丙酮酸底物法）

未找到相應(yīng)參數(shù)組，請于后臺屬性模板中添加

暫未實現(xiàn),敬請期待

關(guān)鍵詞

亮氨酸氨基肽酶

IVD原料